定量PCR儀因操作方便、運(yùn)行速度快、實(shí)驗結(jié)果準(zhǔn)確，受到越來越多的分子生物學(xué)研究者青睞。在實(shí)驗技術(shù)成熟的今天，也許對你來說，難得不是實(shí)驗技術(shù)上的問題而是選擇哪一種熒光定量PCR儀。
　　首先建議大家走出定量PCR儀R的兩個誤區(qū)：
　　誤區(qū)①：定量PCR儀的通道越多越好
　　隨著PCR技術(shù)的成熟運(yùn)用，多重擴(kuò)增越來越熱鬧，熒光定量PCR儀也不能幸免。不少廠家都推出4通道、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀，眼花繚亂的選擇讓人無所適從，就有人一不小心走進(jìn)了“通道越多越好”的誤區(qū)。在使用有些5通道的定量PCR儀時，為了確保實(shí)驗結(jié)果的性和準(zhǔn)確性都要在實(shí)驗中使用ROX（一種熒光染料），這些熒光染料都必須單獨(dú)使用一個檢測通道。這樣以來，真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個，而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本。有的熒光定量PCR的檢測通道是只為自已廠家的的熒光染料或試劑開放的，有效檢測通道也絕非像宣傳資料中宣稱的那么多。在購買前確認(rèn)熒光定量PCR儀器的有效檢測通道尤為重要，不能單單只聽宣傳。
　　誤區(qū)②：定量PCR儀無需梯度功能
　　對于使用染料法的定量PCR反應(yīng)，雖然有各種各樣的PCR引物設(shè)計軟件或者經(jīng)驗公式計算熔解溫度（Tm值），但運(yùn)用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差異會很大。引物的熔解溫度決定了退火溫度。而且模版中堿基的組合千變?nèi)f化，對于特殊片斷，經(jīng)驗公式得到的數(shù)據(jù)不一定能得出準(zhǔn)確的結(jié)果，退火溫度細(xì)微的差異對結(jié)果都可能產(chǎn)生決定性的影響，因而“摸條件”一度是讓人很頭疼的問題。梯度PCR的出現(xiàn)部分解決了一些問題——在反應(yīng)過程中每個孔的溫度控制條件可以在范圍內(nèi)按照梯度變化，根據(jù)結(jié)果，一步就可以摸索出適合的反應(yīng)條件。
　　不單退火溫度，連變性溫度和延伸溫度都可以優(yōu)化——對于多種聚合酶混合酶擴(kuò)增來說這個非常重要，因為酶的佳反應(yīng)溫度可能有顯著差異，優(yōu)化延伸溫度就顯得很重要。